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顯微鏡的使用方法與步驟 一、取鏡和安放  1．右手握住鏡臂，左手托住鏡座。  2．把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣7厘米左右 處）。安裝好目鏡和物鏡。  二、對(duì)光  3．轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔(物鏡的前端與載物臺(tái)要保持2厘米的距離)。  4．把一個(gè)較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開，便于以后同時(shí)畫圖)。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡，可以看到白亮的視野。  三、觀察  5．把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺(tái)上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中心。  6．轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。  7．左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 8．高倍物鏡的使用：使用高倍物鏡之前，必須先用低倍物鏡找到觀察的物象，并調(diào)到視野的正中央，然后轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器再換高倍鏡。換用高倍鏡后，視野內(nèi)亮度變暗，因此一般選用較大的光圈并使用反光鏡的凹面，然后調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。觀看的物體數(shù)目變少，但是體積變大。  四、整理 8．實(shí)驗(yàn)完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到**處，反光鏡豎直放置。**把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。 《注意事項(xiàng)》： 1、嚴(yán)忌單手提取顯微鏡。  2、若須移動(dòng)顯微鏡，務(wù)必將顯微鏡提起再放至適當(dāng)位置，嚴(yán)忌推動(dòng)顯微鏡（推動(dòng)時(shí)造成的震動(dòng)可能會(huì)導(dǎo)致顯微鏡內(nèi)部零件的松動(dòng)，切記!!），使用顯微鏡請(qǐng)務(wù)必小心輕放。  3、使用顯微鏡時(shí)坐椅的高度應(yīng)適當(dāng)，觀察時(shí)更應(yīng)習(xí)慣兩眼同時(shí)觀察，且光圈及光源亮度皆應(yīng)適當(dāng)，否則長(zhǎng)時(shí)間觀察時(shí)極易感覺疲勞。  4、轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤時(shí)務(wù)必將載物臺(tái)降至**點(diǎn)，以免因操作不當(dāng)而刮傷接目鏡之鏡頭。  5、標(biāo)本染色或其它任何操作皆應(yīng)將玻片取下，操作完成后再放回載物臺(tái)觀察，切勿在載物臺(tái)上操作，以免染劑或其它液體流入顯微鏡內(nèi)部或傷及鏡頭。  6、觀察完一種材料，欲更換另一種材料時(shí)，務(wù)必將載物臺(tái)下降至**點(diǎn)，換好玻片后再依標(biāo)準(zhǔn)程序重新對(duì)焦，切勿直接抽換標(biāo)本，以免刮傷鏡頭或玻片標(biāo)本。  7、用畢顯微鏡應(yīng)將載物臺(tái)下降至**點(diǎn)，并將低倍鏡對(duì)準(zhǔn)載物臺(tái)中央圓孔處，將電源線卷好，蓋上防塵罩，并收入存放柜中。

2016年12月31日/生物谷BIOON/---光學(xué)顯微鏡的**目標(biāo)是改善這種方法的分辨率以至于一個(gè)人能夠單個(gè)地區(qū)分彼此間挨得非常近的分子。如今，來自德國(guó)馬克斯-普朗克生物物理化學(xué)研究所的諾貝爾獎(jiǎng)得主Stefan Hell和同事們實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)期以來被認(rèn)為是不可能實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)：他們開發(fā)出一種新的被稱作MINFLUX的熒光顯微鏡，從而**允許利用光學(xué)手段區(qū)分彼此間相隔幾納米的分子。這種顯微鏡在分辨率上要比常規(guī)的光學(xué)顯微鏡高出100倍，而且甚至超過迄今為止**的超分辨率光學(xué)顯微鏡--- Hell開發(fā)的STED和諾貝爾獎(jiǎng)得主Eric Betzig描述的PALM/STORM ---高達(dá)20倍。對(duì)MINFLUX而言，Hell以一種全新的概念結(jié)合了STED和PALM/STORM的優(yōu)勢(shì)。這一突破為科學(xué)家們?cè)诜肿铀缴涎芯可绾伟l(fā)揮功能提供新的機(jī)會(huì)。相關(guān)研究結(jié)果于2016年12月22日在線發(fā)表在Science期刊上，論文標(biāo)題為“Nanometer resolution imaging and tracking of fluorescent molecules with minimal photon fluxes”。Hell解釋道，“我們利用MINFLUX實(shí)現(xiàn)1納米的分辨率，這是單個(gè)分子的直徑---在熒光顯微鏡中可能實(shí)現(xiàn)的＊終分辨率限制。我深信MINFLUX顯微鏡有潛力成為細(xì)胞生物學(xué)＊為基礎(chǔ)的工具之一。基于此，在分子細(xì)節(jié)上繪制細(xì)胞圖譜和實(shí)時(shí)觀察它們內(nèi)部快速發(fā)生的過程將是可能的。這可能能夠在我們了解活細(xì)胞中發(fā)生的分子過程方面引發(fā)變革。”Hell長(zhǎng)期以來深信利用經(jīng)常使用的聚焦光線和常規(guī)透鏡，熒光顯微鏡分辨率能夠增加到單分子水平。事實(shí)上，物理學(xué)家Ernst Abbe在1873年提出光學(xué)顯微鏡的分辨率限制在光的波長(zhǎng)的一半，大約是200納米。100多年后，這種阿貝限制（Abbe limit）仍然是有效的。然而，Hell是第一個(gè)證實(shí)這種限制能夠被STED顯微鏡克服：他1994年想出這種方法，在5年后，實(shí)驗(yàn)性地構(gòu)建出這種STED顯微鏡。STED以及5年后開發(fā)的PALM/STORM實(shí)際上達(dá)到大約20～30納米的分辨率---大約比這種阿貝限制好10倍。由于開發(fā)這些超高分辨率顯微鏡技術(shù)，Hell和Betzig一起在2014年獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。將STED和PALM/STORM的優(yōu)勢(shì)結(jié)合在一起STED和PALM/STORM通過一個(gè)接一個(gè)地開啟和關(guān)閉相鄰的熒光分子，這樣它們有序地發(fā)出熒光，從而將它們區(qū)分開來。然而，這兩種方法在一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)上存在差異：STED顯微鏡利用一種圓環(huán)形的激光束在樣品中的固定位置---除圓環(huán)中心之外的聚焦區(qū)域中的任何一個(gè)位置---上關(guān)閉分子熒光。它的優(yōu)勢(shì)在于這種圓環(huán)形激光束精確地確定對(duì)應(yīng)的熒光分子位于空間中的哪個(gè)點(diǎn)上。它的劣勢(shì)在于事實(shí)上，這種激光束并不足夠強(qiáng)，因而不能夠?qū)l(fā)出的熒光局限在這種圓環(huán)中心的單個(gè)分子上。另一方面，就PALM/STORM而言，它能夠在分子水平上和在隨機(jī)的位置上進(jìn)行開啟和關(guān)閉。它的優(yōu)勢(shì)在于人們已能夠在單分子水平上進(jìn)行檢測(cè)，但是它的劣勢(shì)在于人們并不能夠知道分子在空間中的精確位置。這些位置不得不通過在照相機(jī)上盡可能多收集熒光光子方能找出；獲得不到10納米的分辨率需要50,000多個(gè)檢測(cè)到的光子。因此，人們不能夠?qū)崿F(xiàn)分子水平（一納米）的分辨率。在一種新的概念中，Hell想要將這兩種方法的優(yōu)勢(shì)獨(dú)特地結(jié)合在一起。“這個(gè)任務(wù)是微不足道的。但是，我的同事Francisco Balzarotti、Yvan Eilers和Klaus Gwosch在同我一起利用實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)這種想法上做了出色的工作。”與PALM/STORM一樣，MINFLUX隨機(jī)地開啟和關(guān)閉單個(gè)分子。然而，與此同時(shí)，它們的精確位置可通過類似于STED中的圓環(huán)形激光束加以確定。不同于STED的是，這種圓環(huán)形激光束在MINFLUX中激發(fā)熒光產(chǎn)生。如果這個(gè)分子位于圓環(huán)表面上的話，它將發(fā)出熒光；如果它正好位于昏暗的圓環(huán)中心的話，它不會(huì)發(fā)光熒光，但是人們能夠發(fā)現(xiàn)它的精確位置。Balzarotti開發(fā)出一種聰明的算法以至于這種位置能夠非常快速地和高精度地被確定出來。這位年輕的科學(xué)家解釋道，“利用這種算法，探究圓環(huán)形激發(fā)光束的潛力是可能的。”獲得分子分辨率圖片的Gwosch補(bǔ)充道，“這真是令人難以置信，我們**能夠利用MINFLUX在幾納米尺度上區(qū)分細(xì)節(jié)。”分辨率提高100倍除了實(shí)現(xiàn)分子分辨率外，將STED和PALM/STORM結(jié)合在一起也提供另一種主要優(yōu)勢(shì)：Hell聲稱，“相比而言，MINFLUX更加快速。鑒于它利用一種圓環(huán)形激光束工作，相比于PALM/STORM而言，在獲得每個(gè)分子＊終的分辨率上，它需要更低的光信號(hào)或者說更少的熒光光子。”人們已經(jīng)能夠利用STED實(shí)時(shí)地記錄活細(xì)胞內(nèi)部的影像。但是，正如Eilers所強(qiáng)調(diào)的那樣，如今，在一種時(shí)間分辨率提高100倍的情形下追蹤細(xì)胞中的分子運(yùn)動(dòng)是可能的。他**成功地利用MINFLUX以一種****的時(shí)空分辨率拍攝出活的大腸桿菌中分子運(yùn)動(dòng)的影像。Eilers說，“就速度而言，我們還沒有充分利用MINFLUX。”研究人員深信在未來，能夠研究活細(xì)胞中極其快速發(fā)生的變化，比如細(xì)胞納米機(jī)器的運(yùn)動(dòng)，或者蛋白折疊。